羧肽酶酶制劑商品供應主要來源于豬胰腺,但 價格昂貴。因此,利用微生物獲得大量的羧肽酶,具有 重要的現實意義。黑曲霉(Aspergillus niger)是國際上公 認的安全發酵微生物,且適合采用固態發酵的方式,而 黑曲霉生產羧肽酶發酵工藝條件鮮見報道。是在 前期篩選分離純化獲得的羧肽酶活力較高的黑曲霉(Aspergillus niger)H1-6的基礎上,利用固態發酵技術,優化其 產酶發酵工藝參數,并考察發酵粗酶液在醬油釀造發酵中 的應用效果,為實現羧肽酶的規模化生產、降低成本來滿 足商業化的需要,對推動我國相關產業發展具有重要意義。SW-CJ-ZFD型雙人單面凈化工作臺:蘇州凈化設備有限 公司;DHP-9162型電熱恒溫培養箱:上海博迅實業有限公司;722N型可見分光光度計:上海精密科學儀器有限公司。
當碳源為麩皮時,羧肽酶的固態發酵酶活 力最高(640±32)mU/g,其他依次為玉米芯粉、米糠和甘蔗 渣;當氮源為豆粕時,羧肽酶的酶活力最高(703±11)mU/g, 其他依次為花生粕、玉米粉和菜籽油餅;無機鹽中的NaCl 對羧肽酶的固態發酵酶活力有正相關性,其他的K2PO3、 MgSO4、MnSO4 ·H2O、FeCl3 ·H2O和CaCl2則沒有影響;黑曲 霉接種量為1.0%時,羧肽酶的固態發酵酶活力達到最高 (746±22)mU/g;初始pH值為6.5時,羧肽酶的固態發酵酶 活力最高(773±16)mU/g;水分含量為55%時,羧肽酶的固 態發酵酶活力最高(826±23)mU/g。根據Box-Behnken 試驗設計原理(中心組合試驗設計 原理),設計3因素5水平共20個試驗點的響應面分析試驗, 其中有14個析因點,6個零點重復,以羧肽酶酶活力(Y)為 響應值,以估計試驗誤差,分析黑曲霉H1-6固態發酵羧肽 酶活力的最佳條件。