1 材料與方法
1.1 細(xì)胞株與藥物
人胚胎皮膚成纖維細(xì)胞株(CCC-ESF-1,編號 : BNCC339675)購自北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)研究院, 美洲大蠊提取物(乙醇提取)Ento-A(黃褐色濃稠 膏狀)、Ento-B、Ento-C 和 Ento-D(褐色濃稠膏狀)、 Ento-E( 黃 褐 色 凍 干 粉 末 )、Ento-F( 褐 色 液 體 ) 為云南省昆蟲生物醫(yī)藥研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室自制。
1.2 試劑與耗材
H-DMEM 培養(yǎng)基(美國 Gibco 公司),碳酸氫鈉 (NaHCO3)、Hepes(北京索萊寶科技有限公司),胎 牛血清(美國 Gibco 公司),0.25% 胰蛋白酶(美國 Millipore 公司),噻唑藍(lán)(MTT)、二甲基亞砜(DMSO) ( 美 國 Sigma 公 司 ), 雙 抗 青 鏈 霉 素 混 合 液( 美 國 Millipore 公司),磷酸鹽緩沖液(PBS)(美國 Hyclone 公司)。
1.3 儀器
低速離心機(jī)(SC-2546)(安徽中科中佳科學(xué)儀 器有限公司),多功能酶標(biāo)儀(Spectra Max M2)(美國 Molecular Devices 公司),立式壓力蒸汽滅菌器(YXQ-LS-50SII)(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠),電熱 恒溫水浴鍋(HWS-12 型)(上海一恒科技有限公司), 水套式二氧化碳培養(yǎng)箱(美國 Thermo 公司),潔凈工 作臺(SW-CJ-1FD)(蘇凈集團(tuán)蘇州安泰空氣技術(shù)有 限公司),冰箱(BCD-232MB/A)(廣東容聲電器股份 有限公司),立式超低溫保存箱(DW-86L386)(青島 海爾股份有限公司)。
2 結(jié)果
低倍光學(xué)電子顯微鏡下觀察可見,陰性對照組 CCC-ESF-1 細(xì)胞似長梭形或三角形,生長狀態(tài)良好。 30 μg/ml 美洲大蠊提取物 Ento-C 作用細(xì)胞 24 h 后,細(xì) 胞狀態(tài)較陰性對照組無變化。3 μg/ml 美洲大蠊提取物 Ento-B、Ento-E 和 300 μg/ml 美洲大蠊提取物 Ento-F 分別作用細(xì)胞 24 h 后,與陰性對照組比較,細(xì)胞數(shù)有少 量減少,細(xì)胞形態(tài)有皺縮,發(fā)生變形,三者細(xì)胞狀態(tài)相 似。10 μg/ml 美洲大蠊提取物 Ento-D 作用細(xì)胞 24 h 后, 細(xì)胞數(shù)有一定減少,細(xì)胞形態(tài)皺縮,間隙變大,棱角變 鈍,散布存在。3 μg/ml 美洲大蠊提取物 Ento-A 作用 細(xì)胞 24 h 后,細(xì)胞數(shù)變少明顯,細(xì)胞形態(tài)變短,細(xì)胞纖 維樣逐漸消失,甚至可以看到漂浮的細(xì)胞。
3 討論
瘢痕形成和創(chuàng)面愈合機(jī)制是一個相當(dāng)復(fù)雜的生物 學(xué)過程,其機(jī)制尚未完全清楚,一般認(rèn)為增生性瘢痕的 成因來源于成纖維細(xì)胞的生物學(xué)特性異常,由于成纖 維細(xì)胞增殖、生長失控,膠原過度沉積導(dǎo)致真皮纖維 化。增生性瘢痕的治療方法有中藥療法、抗腫瘤藥治療、 手術(shù)治療、壓力治療、放射治療、激光治療、基因治 療等,目前尚無特效的治療方法。盡管增生性瘢痕屬 于良性病變,但由于影響體表美觀,關(guān)節(jié)部位的瘢 痕還可影響關(guān)節(jié)活動,降低生活質(zhì)量,易復(fù)發(fā),因此是 目前臨床上亟待解決的課題。
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