1991 年，MOORE 等提出了微衛(wèi)星 DNA（Microsatellite DNA）的概念，即 SSR（Simple Sequence Repeats）位點(diǎn)，是一類(lèi)由 1～6 個(gè)核苷酸為重復(fù)單位 組成的長(zhǎng)達(dá) 200～800 bp 的核苷酸串聯(lián)重復(fù)序列。 微衛(wèi)星位點(diǎn)中大量重復(fù)的部分很可能存在變異，變 異會(huì)表現(xiàn)為數(shù)目的整倍性不同或序列的不完全相 同，因而造成位點(diǎn)的多態(tài)性。而揭示這些變異，進(jìn)而 發(fā)現(xiàn)不同的 SSR 在不同的種甚至不同個(gè)體間的多 態(tài)性，是 SSR 標(biāo)記技術(shù)的目的。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 動(dòng)物材料

在野外捕獲活體長(zhǎng)尾倉(cāng)鼠后，取 其尾尖為 DNA 提取材料。捕獲地及數(shù)量見(jiàn)表 1。

1.1.2 試劑

血液 / 細(xì)胞 / 組織基因組 DNA 提取 試劑盒 （天根生化科技有限公司），2×Taq PCR MasterMix 酶（天根生化科技有限公司），ddH2O，瓊 脂糖，1×TAE，30%聚丙烯酰胺（生工生物工程股份 有限公司），5×TBE，過(guò)硫酸銨，TEMED，GeStain 染 液（全式金有限公司），NaCl。

1.1.3 儀器

電熱恒溫水浴鍋（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）；微型高速離心機(jī) Centrifuge 5424 （北京伯樂(lè)生命科學(xué)發(fā)展有限公司）；瓊脂糖凝膠電 泳槽（北京六一儀器廠）；聚丙烯酰胺凝膠電泳槽（北 京六一儀器廠）；凝膠成像系統(tǒng)（Alphalmager HP）； G1000 基因擴(kuò)增儀（杭州博日科技有限公司）；DNA 定量?jī)x NANODROP 2000（賽默飛世爾科技公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 引物設(shè)計(jì)與合成

試驗(yàn)所采用的引物借鑒 了與長(zhǎng)尾倉(cāng)鼠同屬的黑線(xiàn)倉(cāng)鼠 SSR 位點(diǎn)引物， 并由生工生物工程股份有限公司合成。具體序列以 及特點(diǎn)列于表 2。

1.2.2 長(zhǎng)尾倉(cāng)鼠基因組DNA的提取

采集長(zhǎng)尾倉(cāng)鼠尾尖作為 DNA 提取材料，用 DNA 提取試劑盒提取基因組 DNA。采用 1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)有目 標(biāo)條帶后，對(duì)其進(jìn)行定量分析。

2 結(jié)果與分析

1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè) DNA 含量和質(zhì)量， DNA 提取結(jié)果經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳鑒定觀察結(jié)果如 圖 1 所示，質(zhì)量較好。經(jīng) DNA 定量分析，其濃度平 均達(dá)到 1.8 ng/μL，表明濃度足夠，符合進(jìn)行 SSR 位 點(diǎn)擴(kuò)增的試驗(yàn)要求。應(yīng)用與長(zhǎng)尾倉(cāng)鼠同屬的黑線(xiàn)倉(cāng)鼠 SSR 引物擴(kuò) 增后的電泳結(jié)果顯示，引物 SSRf6 的擴(kuò)增結(jié) 果（F）不明顯，長(zhǎng)尾倉(cāng)鼠很可能不存在這一位點(diǎn)，其 他 5 個(gè)位點(diǎn)表現(xiàn)的多態(tài)性都較好。

3 討論

非變性聚丙烯酰胺凝膠具有很高的分辨力，能 很好地分離小片段 DNA（5～500 bp），甚至可以分 離相差 1 bp 或分離單堿基突變所引起的不同片 段。但不同濃度會(huì)影響擴(kuò)增條帶的清晰度。本研究 為了確定分離片段所需最適聚丙烯酰胺的濃度進(jìn) 行了預(yù)試驗(yàn)，分別測(cè)試了 8％，10％，12％的聚丙烯 酰胺凝膠，從預(yù)試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，8％的聚丙烯酰胺 凝膠帶型最整齊且雜帶少，便于觀察分析試驗(yàn)結(jié)果。