原發(fā)性痛經(jīng)系指非盆腔器質(zhì)性病變引起的痛 經(jīng)，以患者下腹部痙攣性疼痛為主要臨床表現(xiàn)。本 病多發(fā)于青年女性，國內(nèi)報(bào)道其發(fā)病率約為 43% ~ 69%。國外流行病學(xué)調(diào)查顯示，原發(fā)性痛經(jīng)的發(fā)病 率由 34%（埃及）至 94%（阿曼）不等，其中重度痛經(jīng) 的患病率約為 0.9%~59.8%。隨著生活壓力增加、 飲食結(jié)構(gòu)改變等因素的影響，原發(fā)性痛經(jīng)的發(fā)病率 呈逐年上升趨勢(shì)，對(duì)女性的生活與工作造成了嚴(yán)重影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

NewClassic MF 電子分析天平（瑞士Mettler Toledo 公司）；Xianou-24 高通量多樣品組織 研磨機(jī) （南京先歐儀器制造有限公司）；Varioskan Lux 多 功 能 微 孔 板 讀 數(shù) 儀 （美 國 Thermo Fisher Scientific 公 司）；Wellwash 全 自 動(dòng) 洗 板 機(jī) （美 國 Thermo Fisher Scientific 公司）；BGZ-240 電熱鼓風(fēng)干燥箱 （上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）； ProFlex Base PCR 系統(tǒng) （美國 Applied Biosystems 公 司）；Milli -Q Integral 5 超 純 水 系 統(tǒng) （美 國 Merck Millipore 公司）；Legend Micro 21R 冷凍高速離心機(jī) （美國 Thermo Fisher Scientific 公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑

元胡止痛口服液的處方由 醋延胡索、白芷兩味中藥組成，輔料為蔗糖、β 環(huán)糊 精、甜菊素、純化水，由河南福森藥業(yè)有限公司提 供，批號(hào)：18090121，實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水稀釋成所需濃 度的溶液。羅通定片的有效成分為延胡索乙素（每 片 30 mg），購自山西云鵬制藥有限公司，批號(hào)： G180302，實(shí)驗(yàn)時(shí)取出片劑研磨成細(xì)粉，加入蒸餾水 與 0.5%（W/V）羧甲基纖維素鈉，配制成所需濃度的 混懸液。己烯雌酚（上海源葉生物科技有限公司，批 號(hào)：X13M6Y1）；縮宮素（大連美侖生物技術(shù)有限公 司，批號(hào)：N1108A）；羧甲基纖維素鈉（上海申光食用 化學(xué)品有限公司，批號(hào)：20180816）；肝素鈉（北京索 萊寶科技有限公司，批號(hào)：409G024）；水合氯醛（上 海源葉生物科技有限公司，批號(hào)：Z23A9Y68668）。 E2 酶聯(lián)反應(yīng)吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)試劑盒（批號(hào)： L181010239） 與 PGF2a ELISA 檢測(cè)試劑盒 （批號(hào)： L181023119） 購自武漢云克隆科技股份有限公司。 大鼠 Prog ELISA 檢測(cè)試劑盒 （批號(hào)：20181112005） 購自武漢六合生物技術(shù)有限公司。大鼠 PGE2 ELISA 檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：C0174080121）、大鼠 TXB2 ELISA 檢測(cè)試劑盒 （批號(hào)：A27017483） 與大鼠 6-ketoPGF1α ELISA 檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：D10017485）購自武 漢華美生物工程有限公司。MDA 檢測(cè)試劑盒（批號(hào)： 082418181030）、總 SOD 活性檢測(cè)試劑盒 （批號(hào)： 092618181030）、GSH -Px 檢 測(cè) 試 劑 盒 （ 批 號(hào) ： 060518181114）、NO 檢 測(cè) 試 劑 盒 （ 批 號(hào) ： 052218181029）與 BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒（批號(hào)： 070618181017） 購自上海碧云天生物技術(shù)研究所。 Ca2+ 試劑盒（批號(hào)：20181123）購自南京建成生物工 程研究所。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SD 大鼠，雌性，體質(zhì)量 180~200 g， SPF 級(jí)，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，合格證號(hào)：SCXK（京）2017-0001。飼養(yǎng)于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，飼養(yǎng)設(shè)施合 格證號(hào)：SVXK 津 2009-0002。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物操作均遵從 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委 員會(huì)審定的規(guī)范要求。

1.4 分組與造模方法

將 60 只健康雌性 SD 大鼠 按體質(zhì)量隨機(jī)分為 6 組，分別為空白組、模型組、元 胡止痛口服液高劑量組（高劑量組）、元胡止痛口服 液中劑量組（中劑量組）、元胡止痛口服液低劑量組 （低劑量組）以及羅通定片陽性藥組（陽性藥組），每 組 10 只。參考文獻(xiàn)方法復(fù)制痛經(jīng)大鼠模型。除空 白組外，其余各組大鼠灌胃給予己烯雌酚 2.00 mg/kg， 每日 1 次，連續(xù) 12 d。

1.5 給藥方法

于造模第 6 天開始給藥，根據(jù)預(yù)實(shí) 驗(yàn)結(jié)果，高劑量組、中劑量組、低劑量組大鼠分別以 3.20、1.07、0.36 g/kg 劑量灌胃給予元胡止痛口服液。 根據(jù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與人之間藥物劑量等效換算方法，陽 性藥組大鼠灌胃給予羅通定混懸液 0.03 g/kg。空白 對(duì)照組與模型組灌胃等體積蒸餾水，各組大鼠每日 給藥 1 次，連續(xù)給藥 7 d。

1.6 扭體反應(yīng)觀察

于造模第 12 天，末次給藥 1 h 后，模型組、高劑量組、中劑量組、低劑量組與陽性 藥組大鼠腹腔注射縮宮素 40 U/kg，空白組注射等體 積生理鹽水。記錄注射縮宮素后 30 min 內(nèi)各組大鼠 發(fā)生扭體反應(yīng)（腹部收縮內(nèi)凹，軀干與后肢伸展，臀 部與一側(cè)肢體內(nèi)旋）的數(shù)量以及扭體次數(shù)，并按公 式 1 計(jì)算大鼠的扭體發(fā)生率。 扭體發(fā)生率（%）=發(fā)生扭體反應(yīng)動(dòng)物數(shù)量/實(shí)驗(yàn) 動(dòng)物數(shù)量×100%（公式 1）

1.7 檢測(cè)指標(biāo)

注射縮宮素 1 h 后，各組大鼠腹腔 注射 3.50%（V/V）水合氯醛溶液（0.10 mL/kg）麻醉， 腹主動(dòng)脈采血，加入肝素抗凝管，于 1 500 g，4 ℃條 件下離心 5 min，取上清液，采用 ELISA 法測(cè)定大鼠 血漿 E2 與 Prog 水平，采用 TBA 法檢測(cè)大鼠血漿 MDA 含量，運(yùn)用 WST-8 法測(cè)定血漿 SOD 活性，并 采用紫外比色檢測(cè) GSH-Px 活性。 另于采血后取大鼠子宮組織，精密稱質(zhì)量，加 入生理鹽水，在冰浴下制成 10%（W/V）的組織勻漿， 于 1 500 g、4 ℃條件下離心 10 min，分離上清液，采 用ELISA 法測(cè)定大鼠子宮組織勻漿中 PGF2α、PGE2、 TXB2、6-keto-PGF1α 水平。采用甲基百里香酚藍(lán)比色 法測(cè)定組織勻漿中 Ca2+ 含量，運(yùn)用 Griess 試劑法測(cè) 定 NO 含量，并采用 BCA 法測(cè)定大鼠組織勻漿總蛋 白含量。上述測(cè)定方法均按各試劑盒說明進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用 ELISACalc 軟件進(jìn)行分析，以四參數(shù) Logistic 曲線模型擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，并通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì) 算各樣本濃度。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用 SPSS 19.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分 析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，正態(tài)分布資 料采用單因素方差分析比較多組間差異，偏態(tài)分布 資料采用 Wilcoxon 秩和檢驗(yàn)分析，P<0.05 表示差異 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

空白組大鼠未出現(xiàn)扭體反應(yīng)， 模型組大鼠在注射縮宮素后 30 min 內(nèi)的扭體發(fā)生 率為 90%，提示動(dòng)物模型成功建立。與模型組相比， 陽性藥組、高劑量組、中劑量組、低劑量組大鼠扭體 發(fā)生率均有不同程度的降低，其中高劑量組與陽性 藥組大鼠扭體反應(yīng)次數(shù)顯著減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué) 意義（P<0.05），詳見表 1。

與正常大鼠相比，原發(fā)性 痛經(jīng)模型大鼠血漿 E2 水平顯著升高（P<0.01），血漿 Prog 水平顯著降低（P<0.05）。但陽性藥與元胡止痛 口服液給藥后，模型大鼠血漿 E2 與 Prog 水平均未 見顯著回調(diào)。見圖 1。

3 討論

原發(fā)性痛經(jīng)的主要癥狀表現(xiàn)為周期發(fā)作的下 腹部痙攣性疼痛，縮宮素誘導(dǎo)的痛經(jīng)動(dòng)物模型是觀察原發(fā)性痛經(jīng)疼痛程度的首選模型，而扭體反應(yīng)則 是評(píng)價(jià)動(dòng)物疼痛程度的經(jīng)典行為學(xué)指標(biāo)，目前在原 發(fā)性痛經(jīng)的機(jī)制與防治研究中有廣泛應(yīng)用。本研 究首先灌胃給予大鼠己烯雌酚以提高子宮敏感性， 之后注射縮宮素誘發(fā)子宮痙攣性收縮，觀察到模型 大鼠出現(xiàn)典型的扭體反應(yīng)，與文獻(xiàn)報(bào)道一致，提示 痛經(jīng)大鼠模型的成功建立。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，元胡 止痛口服液可顯著減少痛經(jīng)大鼠扭體反應(yīng)發(fā)生次 數(shù)，降低大鼠扭體反應(yīng)發(fā)生率，提示元胡止痛口服 液對(duì)縮宮素誘導(dǎo)的痛經(jīng)大鼠模型具有顯著的鎮(zhèn)痛作用。